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1.制備細胞懸液：對于懸液培養(yǎng)的細胞，可直接進行下面的步驟2（計數(shù)與計算過程）。如果計數(shù)對象為貼壁生長的細胞，首先需將培養(yǎng)物按如下步驟制備成細胞懸液。

①終止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液吸出，用PBS洗培養(yǎng)物一次。

②給培養(yǎng)瓶內(nèi)加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時，棄消化液。

③加入一定量的培養(yǎng)液（如果這些培養(yǎng)細胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使細胞脫壁而制成細胞懸液。

2.計數(shù)與計算過程

①在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。

②用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液，至蓋玻片被液體充滿為止。

③置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者，對于細胞團按單個細胞計數(shù)。

④按下式計數(shù)細胞懸液的密度：細胞密度＝（4個大格細胞總數(shù)/4）×104個/ml 。

二、注意事項：

①務(wù)必使分散成單個細胞，取樣計數(shù)前，充分混勻細胞懸液。

②顯微鏡下計數(shù)時，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分。

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